用放射性同位素或熒光物質(zhì)標(biāo)記的特異DNA或RNA分子,通過分子雜交技術(shù)檢測(cè)與之互補(bǔ)的核苷酸順序的技術(shù)。核酸分子探針的制備方法有以下幾種:
缺口移位標(biāo)記 DNA水解酶I能夠使雙鏈DNA分子產(chǎn)生缺口。DNA聚合酶能將缺口從5′→3′方向擴(kuò)大,同時(shí)將5′端的核苷酸切除,此酶還同時(shí)具有5′→3′聚合功能,在有4種單核苷酸(dNTP)的反應(yīng)系統(tǒng)中將切去的核苷酸補(bǔ)上。缺口沿著DNA的另一條鏈位移,同時(shí)有放射性的核苷酸就會(huì)摻入DNA分子中,成為有高比放性的DNA探針。一般單核苷酸標(biāo)記的摻入量30%,比放性可達(dá)108cpm/μg DNA。
T4DNA聚合酶標(biāo)記 T4 DNA聚合酶有核酸外切酶作用,在沒有dNTP的條件下,從3′→5′切除核苷 ......
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